撰文丨王聪聚美策略
编辑丨王多鱼
排版丨水成文
CAR-T 细胞疗法是治疗领域的一项重大突破，也是基因工程细胞作为治疗手段的有力证明。除了已获批准用于白血病等血液类癌症治疗以外，CAR-T 细胞疗法还在实体瘤、自身免疫疾病以及组织再生方面也展现出巨大潜力。
然而，大量临床试验显示，CAR-T 细胞疗法的效果仍面临着重大障碍，包括 T 细胞适应性和增殖能力有限、癌症预处理患者的自体 T 细胞数量不足、慢性 CAR 刺激导致 T 细胞耗竭、患者体内的免疫抑制和营养匮乏的环境，以及 CAR-T 细胞通过胞啃作用从靶细胞获取抗原时发生自相残杀等。
CRISPR 基因编辑技术能够通过敲除特定基因，提高 CAR-T 细胞疗法的癌症治疗效果，但之前的研究通常是在体外进行测试。
而最近，国际顶尖学术期刊Nature背靠背发表了两篇研究论文，这两项研究利用 CRISPR 筛选和大规模体内验证，评估了 CRISPR 筛选到的基因在敲除后是否能够通过增强 CAR-T 细胞的增殖和持久性来提高癌症免疫治疗效果。
这项研究来自奥地利科学院分子医学研究中心聚美策略，论文题为：Systematic discovery of CRISPR-boosted CAR T cell immunotherapies（系统性发现经 CRISPR 增强的 CAR-T 细胞免疫疗法）。
CAR-T 细胞疗法在治疗血液类癌症方面已取得显著成效，但 CAR-T 细胞功能障碍仍是导致治疗失败的常见原因。
在这项研究中，研究团队推出CELLFIE（Cell engineering for immunotherapy enhancement）平台，这是一个用于在多个临床目标上增强 CAR-T 细胞 的 CRISPR 筛选平台。
首先，研究团队在人类原代 CAR-T 细胞中进行了全基因组筛选，检测结果涵盖了 T 细胞生物学的关键方面，包括增殖、靶细胞识别、活化、凋亡、自相残杀以及耗竭。接下来，研究团队在人类异种移植小鼠模型中，利用他们之前开发的体内 CRISPR 筛选方法——CROP-seq，对上一步筛选出的候选基因进行优先级排序，从中确定了几个能增强 CAR-T 细胞疗效的基因敲除位点。
最值得注意的是，研究团队发现，RHOG基因敲除是一种强大且意料之外的 CAR-T 细胞增强方式，无论是单独敲除还是与
FAS基因敲除联合使用，研究团队进一步在多种体内模型、CAR 设计和供体样本以及患者来源的细胞中进行了验证。为了展示 CELLFIE 平台的多功能性，研究团队还进行了组合 CRISPR 筛选以识别协同基因对，并进行了饱和碱基编辑筛选以表征RHOG突变。
总的来说，该研究发现、验证并从生物学角度对 CRISPR 增强型 CAR-T 细胞进行了表征，最终发现了RHOG基因敲除是增强 CAR-T 细胞功能的强效手段。
RHOG基因敲除的 CAR-T 细胞 在广泛使用的基准测试中优于标准 CAR-T 细胞聚美策略，这为优化基于细胞的免疫疗法奠定了基础资源。
这项研究来自哈佛医学院麻省总医院，论文题为：In vivo CRISPR screens identify modifiers of CAR T cell function in myeloma（体内 CRISPR 筛选鉴定出多发性骨髓瘤中 CAR-T 细胞功能的调控因子）。
CAR-T 细胞疗法在血液系统恶性肿瘤中表现出极高的疗效。然而，在许多患者中，CAR-T 细胞会逐渐减少，从而导致了癌症复发。
在这项研究中，研究团队对靶向 B 细胞成熟抗原的 CAR-T 细胞进行了体内功能缺失的 CRISPR 筛选，以研究在人类多发性骨髓瘤模型中影响 CAR-T 细胞持久性和功能的基因。
研究团队追踪了体外以及体内早期和晚期时间点经 CRISPR 文库编辑的 T 细胞的扩增和持久性，以追踪从制造到在肿瘤中存活的基因修饰的 CAR-T 细胞的表现。这些筛选揭示了 CAR-T 细胞扩增和持久性的特定背景调控因子。
RASA2SOCS1的缺失增强了体外 T 细胞的扩增，而PTPN2ZC3H12ARC3H1的缺失则赋予了体内 CAR-T 细胞早期生长优势。
值得注意的是，该研究发现，细胞周期调控因子CDKN1B是体内晚期时间点 CAR-T 细胞适应性的最重要限制因素。敲除
CDKN1B基因，增加了 CAR-T 细胞的增殖和效应功能，显著提高了肿瘤清除率和总体生存率。
总的来说，这项研究表明，基因扰动对 CAR-T 细胞的影响会随时间推移和不同环境而变化，突出了
CDKN1B是构建治疗多发性骨髓瘤的高效 CAR-T 细胞的有前景的新靶点，并强调了体内筛选在识别可增强 CAR-T 细胞疗效的基因方面的巨大潜力。
论文链接：
https://www.nature.com/articles/s41586-025-09507-9
https://www.nature.com/articles/s41586-025-09489-8
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